（2）既可以杀死病菌，又能保持物品中营养物质风味不变

（3）破坏DNA结构 消毒液

（4）氯气

（5）冷空气没有排除充分

【点评】本题考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求学生掌握无菌技术的主要内容，识记不同消毒和灭菌方法的对象以及原理，并结合所学知识准确答题。

【生物---选修3：现代生物科技专题】

12．某种荧光蛋白（GFP）在紫外线或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L1）基因连接在GFP基因的5′末端，获得了L1﹣GFP融合基因（简称甲），并将其插入质粒PO，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切点的示意图如下，图中E1～E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。

回答下列问题：

（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒PO时，使用了两种限制酶，这两种酶是E1、E4。使用这两种酶进行酶切是为了保证甲的完整，也是为了保证甲与载体正确连接。

（2）将P1转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色的荧光，则说明L1基因在牛的皮肤细胞中完成了转录和翻译过程。

（3）为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的细胞核移入牛的去核卵母细胞中，体外培养，胚胎移植等。

（4）为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的核DNA（填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”）作为PCR模板。

【考点】Q2：基因工程的原理及技术

【专题】111：图文信息类简答题；548：基因工程．

【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因﹣﹣DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA﹣﹣分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质﹣﹣抗原﹣抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

【解答】解：（1）该团队在将甲插入质粒PO时，使用了两种限制酶，这两种酶是E1、E4，使用这两种酶进行酶切可以保证目的基因两端有启动子和终止子，可以保证甲的完整，也是为了保证甲与载体正确连接。

（2）在该细胞中观察到了绿色的荧光，检测到了基因表达的产物，可以说L1基因在牛的皮肤细胞中完成了转录和翻译过程。

（3）为了获得含有甲的牛，该团队可以利用细胞核移植技术，将能够产生绿色荧光细胞的细胞核移入牛的去核卵母细胞中，体外培养，胚胎移植等。

（4）克隆牛利用的是细胞核移植技术，遗传物质来自于细胞核，所以用PCR方法进行鉴定。在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的核DNA 作为PCR模板。

故答案为：

（1）E1、E4 甲的完整 甲与载体正确连接

（2）转录 翻译

（3）细胞核 去核卵母细胞

（4）核DNA

【点评】本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生运用所学基础知识，结合所学知识解决相关的生物学问题的能力。