（2）图1为质粒限制酶酶切图谱．bglB基因不含图中限制酶识别序列．为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列．

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶．

Ⅱ．温度对BglB酶活性的影响

（4）据图2、3可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会失活；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在B（单选）．

A.50℃B.60℃C.70℃D.80℃

Ⅲ．利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性

在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率．经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因．

（5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中A、C（多选）．

A．仅针对bglB基因进行诱变 B．bglB基因产生了定向突变

C．bglB基因可快速累积突变 D．bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变．

【考点】Q2：基因工程的原理及技术

【分析】基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因．

启动子是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列，是基因的一个组成部分，控制基因表达（转录）的起始时间和表达的程度．

终止子是给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列．

分析图2，60～70℃时该酶的相对活性最高，而在40℃和80℃活性均降低，并且酶在高温条件下会失活．

分析图3，随着保温时间的延长，80℃保温30分钟后，BglB酶会失活；而随着保温时间的延长，70℃条件下的酶活性下降明显．

【解答】解：（1）根据题意可知，嗜热土壤芽胞杆菌产生的β﹣葡萄糖苷酶（BglB），因此PCR扩增bglB基因时，选用嗜热土壤芽孢杆菌基因组DNA作模板．

（2）根据启动子和终止子的生理作用可知，目的基因应导入启动子和终止子之间．图中看出，两者之间存在于三种限制酶切点，但是由于Xbal在质粒不止一个酶切位点，因此为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列．

（3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶．

（4）据图2、3可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会失活；图2中看出，60～70℃时该酶的相对活性最高，而图3中看出，随着保温时间的延长，70℃条件下的酶活性下降明显，因此为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在60℃．

（5）PCR过程中仅针对bglB基因进行诱变，而用诱变剂直接处理对嗜热土壤芽胞杆菌所有DNA均起作用，A正确；基因突变具有不定向性，B错误；突变后的bglB基因可以进行PCR技术扩增，因此可快速累积突变，C正确；bglB基因突变会导致酶的氨基酸数目改变，D错误．

故答案为：

（1）嗜热土壤芽孢杆菌；

（2）NdeⅠBamHⅠ；

（3）转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶；

（4）失活 B；

（5）A、C．

【点评】本题考查了基因工程以及温度影响酶活性的相关知识，意在考查考生的识图分析能力和理解判断能力，难度适中．考生要能够识记目的基因存在于启动子和终止子之间；能够从图23中中比较出60℃和70℃条件下酶活性的区别；明确基因突变具有不定向性．

9．（16分）果蝇是遗传学研究的经典材料，其四对相对性状中红眼（E）对白眼（e）、灰身（B）对黑身（b）、长翅（V）对残翅（v）、细眼（R）对粗眼（r）为显性．如图是雄果蝇M的四对等位基因在染色体上的分布．

（1）果蝇M眼睛的表现型是红眼细眼．

（2）欲测定果蝇基因组的序列，需对其中的5条染色体进行DNA测序．

（3）果蝇M与基因型为XEXe的个体杂交，子代的雄果蝇既有红眼性状又有白眼性状．

（4）果蝇M产生配子时，非等位基因B（或b）和v（或V）不遵循自由组合规律．若果蝇M与黑身残翅个体测交，出现相同比例的灰身长翅和黑身残翅后代，则表明果蝇M在产生配子过程中V和v（或B和b）基因随非姐妹染色单体的交换而发生交换，导致基因重组，产生新的性状组合．

（5）在用基因型为BBvvRRXeY和bbVVrrXEXE的有眼亲本进行杂交获取果蝇M的同时，发现了一只无眼雌果蝇．为分析无眼基因的遗传特点，将该无眼雌果蝇与果蝇M杂交，F1性状分离比如下：

F1雌性﹕雄性灰身﹕黑身长翅﹕残翅细眼﹕粗眼红眼﹕白眼

1﹕13﹕13﹕13﹕13﹕1

1﹕13﹕13﹕1//

①从实验结果推断，果蝇无眼基因位于7、8号（填写图中数字）染色体上，理由是无眼、有眼基因与其他各对基因间的遗传均遵循自由组合定律．