二、非选择题：本卷共2题，共44分．

7．（26分）Ⅰ．如图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性金银，BamHI、HindIII、SmaI直线所示为三种限制酶的酶切位点。

据图回答：

（1）图中将人乳蛋白基因插入载体，需用HindⅢ和BamHⅠ限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行。

（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是A（填字母代号）。

A．启动子 B．tetR C．复制原点 D．ampR

（3）过程①可采用的操作方法是C（填字母代号）。

A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化 C．显微注射 D．细胞融合

（4）过程②可采用的生物技术是胚胎移植技术。

（5）对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。这利用了细胞的全能性。

（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用C（填字母代号）技术。

A．核酸分子杂交 B．基因序列分析 C．抗原﹣抗体杂交 D．PCR

Ⅱ．某地区从1964年开始使用杀虫剂杀灭蚊子幼虫，至1967年中期停用。如图是五年间蚊子幼虫基因型频率变化曲线。R表示杀虫剂抗性基因，S表示野生敏感型基因。据图回答：

（1）R基因的出现是基因突变的结果。

（2）在RR基因型频率达到峰值时，RS、SS基因型频率分别为4%和1%，此时R基因的频率为97%。

（3）1969年中期RR基因型几近消失，表明在不在使用杀虫剂的环境条件下，RR基因型幼虫比SS基因型幼虫的生存适应能力低。

（4）该地区从此不再使用杀虫剂。预测未来种群中，最终频率最高的基因型是SS，原因是在不使用杀虫剂环境下，持续的选择作用使R基因频率越来越低。

【考点】B5：基因频率的变化；Q2：基因工程的原理及技术；S5：胚胎移植

【分析】分析题图：图示是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线，包括基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、早期胚胎培养、胚胎移植等步骤，其中过程①是将重组质粒导入受体细胞；过程②需采用胚胎移植技术。

分析曲线图：某地区从1964年开始使用杀虫剂杀灭蚊子幼虫，RR基因型频率逐渐升高，而RS和SS基因型频率逐渐降低；1967年中期停用杀虫剂后，RR基因型频率逐渐降低，而RS和SS基因型频率逐渐升高。

【解答】解：（1）外源DNA分子上含有限制酶BamHI、HindIII、SmaI的切割位点，其中限制酶SmaI的切割位点位于目的基因上，所以获取目的基因和构建基因表达载体时，应用限制酶HindⅢ和BamHⅠ．用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割质粒后，会破坏质粒上的四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含氨苄青霉素的培养基上进行。

（2）启动子是能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列。

（3）过程①是将重组质粒导入受体细胞，当受体细胞是动物细胞时，将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法。

（4）过程②需要采用胚胎移植技术。

（5）胚胎分割技术的理论基础是细胞的全能性。

（6）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用抗原﹣抗体杂交技术。

Ⅱ．（1）基因突变是产生新基因的途径，R为杀虫剂抗性基因，是基因突变产生的。

（3）1969年中期RR基因型几近消失，表明在不在使用杀虫剂的环境条件下，RR基因型幼虫比SS基因型幼虫的生存适应能力低。

（4）该地区从此不再使用杀虫剂后，在不适用杀虫剂环境下，持续的选择作用使R基因频率越来越低，因此未来种群中，最终频率最高的基因型应该是SS。

故答案为：

Ⅰ．（1）HindⅢ和BamHⅠ氨苄青霉素

（2）A

（3）C

（4）胚胎移植技术

（5）全能

（6）C

Ⅱ（1）基因突变

（2）97%