（3）根据PCR操作流程可知，设定引物要注意退火温度，设定与扩增片段的长度要注意延伸时间；

（4）看图可知虚线框中第一个密码子是AUG，共8个。因为框后第一个密码子首字母是U，后面两位可能组合是4×4＝16种，除去∫三个终止密码UAA、UAG、UGA，最多有13中密码子；

（5）看图表可知，Ph为8.5，50mmol/L Tris﹣HCl酶活性为99.5，最大。

故答案：

（1）基因组DNA

（2）5′使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连

（3）②⑥

（4）8 13

（5）pH为8.5，50mmol/L Tris﹣HCl

【点评】本题考查知识点有基因工程，PCR技术以及酶活性的影响因素，通过上述考查培养学生综合分析能力和实验能力，是一道区分度很好题目。

33．（8分）以下两对基因与鸡羽毛的颜色有关：芦花羽基因B对全色羽基因b为显性，位于Z染色体上，而W染色体上无相应的等位基因；常染色体上基因T的存在是B或b表现的前提，tt时为白色羽。各种羽色表型见下图。请回答下列问题：

（1）鸡的性别决定方式是ZW型。

（3）一只芦花羽雄鸡与ttZbW杂交，子代表现型及其比例为芦花羽：全色羽＝1：1，则该雄鸡基因型为

TTZBZb。

（5）雏鸡通常难以直接区分雌雄，芦花羽鸡的雏鸡具有明显的羽色特征（绒羽上有黄色头斑）。如采用纯种亲本杂交，以期通过绒羽来区分雏鸡的雌雄，则亲本杂交组合有（写出基因型）TTZbZb×TTZBW；TTZbZb×ttZBW；ttZbZb×TTZBW。

【考点】87：基因的自由组合规律的实质及应用；8A：伴性遗传

【专题】43：正推反推并用法；527：基因分离定律和自由组合定律．

【分析】分析题干信息可知，与鸡羽毛颜色有关的基因位于非同源染色体上，因此遵循基因的自由组合定律。根据基因的功能可以判断：芦花羽的基因型为T_ZBZ﹣、T_ZBW；全色羽的基因型为T_ZbZb、T_ZbW；白色羽的基因型为tt__。

【解答】解：（1）性别决定类型包括XY型和ZW型，根据题意可知，鸡的性别决定方式是ZW型。

（3）一只芦花羽雄鸡（T_ZBZ﹣）与ttZbW杂交，由于后代没有出现白色羽，则该雄鸡的基因型一定为TT；又由于子代表现型及其比例为芦花羽：全色羽＝1：1，则该雄鸡基因型为TTZBZb。

（5）雏鸡通常难以直接区分雌雄，芦花羽鸡的雏鸡具有明显的羽色特征（绒羽上有黄色头斑）。如采用纯种亲本杂交，以期通过绒羽来区分雏鸡的雌雄，则亲本杂交组合有TTZbZb×TTZBW（雄鸡全为芦花羽，雌鸡全为全色羽）；TTZbZb×ttZBW（雄鸡全为芦花羽，雌鸡全为全色羽）；ttZbZb×TTZBW（雄鸡全为芦花羽，雌鸡全为全色羽）。

故答案为：

（1）ZW

（3）TTZBZb

（5）TTZbZb×TTZBW；TTZbZb×ttZBW；ttZbZb×TTZBW

【点评】本题考查了基因自由组合定律和伴性遗传的有关知识，要求学生掌握性别决定类型以及性染色体组成与性别的关系，能够结合题干信息确定基因型和表现型之间的关系，再结合遗传定律进行相关概率的计算。