（2）在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如图所示． 细胞干重在12d后下降的原因有蔗糖浓度下降，pH降低；培养液中蔗糖的作用是提供能源、调节渗透压．

（3）多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体． 二倍体愈伤组织细胞经秋水仙素（低温）处理，会产生染色体加倍的细胞．为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常用纤维素酶和果胶酶解离愈伤组织．若愈伤组织细胞（2n）经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是经加倍到4n的细胞处于有丝分裂后期、经加倍到8n的细胞处于有丝分裂中期．

（4）为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似． 下列说法正确的有①③④ （填序号）．

①选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋 ②必须在光照条件下培养

③培养过程中需通空气 ④固定化后植物细胞生长会变慢．

【考点】J4：制备和应用固相化酶；R4：植物培养的条件及过程

【分析】植物组织培养过程中需经过脱分化、再分化两个过程，培养条件也在随着培养过程的进行而发生变化，如再分化出根芽后要给予适宜的光照．

【解答】解：（1）外植体经诱导脱分化后形成愈伤组织．

（2）据图分析：由蔗糖浓度下降可知，外植体离体培养过程中需要消耗蔗糖，12天后蔗糖浓度变化不大；pH下降会影响酶的活性，愈伤组织细胞不能进行光合作用，对物质的合成小于分解，故细胞干重下降；植物组织培养过程中，蔗糖既能提供能源也能调节细胞渗透压．

（3）秋水仙素或低温都可以抑制纺锤体形成，诱导染色体数目加倍，形成多倍体，细胞壁的成分为纤维素和果胶，用纤维素酶和果胶酶处理后再压片更容易分离得到单层细胞，诱导的愈伤组织细胞为2n，经诱导处理后，观察到染色体数为8n 的细胞，可能为经历了两次诱导，加倍到4n 的细胞处于有丝分裂后期，也可能为经历了三次诱导，加倍到8n 的细胞处于有丝分裂中期．

（4）根据题干知，获得植物次生代谢产物，用植物外植体获得愈伤组织再悬浮培养即可，生产中采用植物细胞的固定化技术，应包埋旺盛生长的愈伤组织细胞，①正确，②脱分化过程中光会抑制愈伤组织的形成，②错误，③植物为需氧型生物，培养过程中需通空气，保证其有氧呼吸，缺氧会导致其无氧呼吸产生酒精，对其有毒害作用，③正确，④固定化后植物细胞与细胞悬浮培养相比，物质运输速率降低，生长会变慢，④正确．

故答案为：

（1）脱分化；

（2）蔗糖浓度下降，pH 降低； 提供能源； 调节渗透压；

（3）秋水仙素（低温）； 果胶； 经加倍到4n 的细胞处于有丝分裂后期；

经加倍到8n 的细胞处于有丝分裂中期；

（4）①③④．

【点评】本题为2014年最新的江苏高考真题，以图示的形式考查了植物组织培养过程中的应用，意在考察学生对所学知识的灵活运用能力．

30．（8分）为了获得β﹣胡萝卜素产品，某小组开展了产β﹣胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验． 请回答下列问题：

（1）实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是干热灭菌和湿热灭菌；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该用牛皮纸包扎器皿．

（2）为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是抑制细菌生长．

（3）如图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是①． （填序号）

①安全阀、放气阀、压力表

②放气阀、安全阀、压力表

③安全阀、放气阀、温度表

④放气阀、安全阀、温度表

（4）为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是接种环温度过高，菌被杀死．

（5）为增加β﹣胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是有助于研磨充分；研磨时不需要 （填“需要”或“不需要”）添加 CaCO3，理由是β﹣胡萝卜素较耐酸．

【考点】1W：真题集萃；3I：叶绿体色素的提取和分离实验；I1：微生物的分离和培养

【分析】阅读题干和题图可知，本题涉及的知识有微生物的培养与分离及β﹣胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验，明确知识点，梳理相关的基础知识，分析题图，结合问题的具体提示综合作答．

【解答】解：（1）灭菌常用方法有高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌等，培养皿常用高压蒸汽灭菌、干热灭菌．将培养皿放入灭菌锅之前通常用牛皮纸或报纸包扎避免灭菌后的再次污染．

（2）青霉素能破坏细菌的细胞壁并在细菌的繁殖期起杀菌作用，因此添加青霉素可抑制细菌的生长．

（3）乙连接软管为排（放）气阀，甲为安全阀，丙是压力表．

（4）三块平板有两块平板长有菌落，说明含有菌株并可在培养基上生长；而其中一块未见菌落，说明菌株死亡．因此，应在接种过程中接种环灼烧后未冷却或未足够冷却，使菌株因温度过高被杀死．

（5）石英砂有助于研磨充分．CaCO3用于中和酸性物质，β﹣胡萝卜素较耐酸，因此不需添加．

故答案为：

（1）干热灭菌和湿热灭菌（高压蒸汽灭菌）； 用牛皮纸包扎器皿；

（2）抑制细菌（放线菌）生长；

（3）①；