（2）非糯性：糯性＝1：1

（3）WY：Wy＝1：1

（4）非糯性黄胚乳：非糯性白胚乳：糯性黄胚乳：糯性白胚乳＝3：1：3：1 非糯性黄胚乳：非糯性白胚乳：糯性黄胚乳：糯性白胚乳＝9：3：3：1

（5）非糯性白胚乳：糯性白胚乳＝8：1

【点评】本题考查基因的自由组合定律的实质及应用相关知识点，意在考查学生对所学知识的理解与掌握程度，培养学生判断基因型和表现型的能力。特别注意染色体缺失的花粉不育，而染色体缺失的雌配子可育。

33．（8分）请回答基因工程方面的有关问题：

（1）利用PCR技术扩增目的基本因，其原理与细胞内DNA复制类似（如图所示）

图1中引物中为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础．

②在第三轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段．

（2）设计引物是PCR技术关键步骤之一．某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如图2），请分别说明理由．

①第一组：引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效； ②引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效．

（3）PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能反映DNA聚合酶的功能，这是因为DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上．

（4）用限制酶EcoRV、MboI单独或联合切割同一种质粒，得到DNA片段长度如图3（1kb即1000个碱基对），请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、MboI的切割位点．

【考点】L3：PCR技术的基本操作和应用；Q2：基因工程的原理及技术

【分析】采用PCR技术扩增DNA的过程为：变性、退火、延伸．根据PCR过程的特点绘制PCR过程示意图如图所示：

据图答题．

②由图示可知，第一、二轮循环合成的子链长度均不同，根据半保留复制特点可知，前两轮循环产生的四个DNA分子的两条链均不等长，第三轮循环产生的DNA分子存在等长的两条核苷酸链，如上图．

（2）在第1组引物中，引物Ⅰ的部分碱基序列是CAGGCT，引物Ⅱ的部分碱基序列是AGCCTG，若利用这两个引物进行DNA扩增，会因其中的部分碱基发生碱基互补配对而使引物失效．在第2组引物中，引物Ⅰ′的部分碱基序列是AACTG和CAGTT，该引物一旦发生自身折叠，也将会出现部分碱基发生碱基互补配对而使引物失效．

（3）图中直接将两个脱氧核苷酸合成DNA单链，这不能反映DNA聚合酶的功能，因为DNA聚合酶只能在DNA模板存在的条件下，将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上．

（4）根据图示，该质粒为环形质粒．用限制酶EcoRⅤ单独切割该质粒时，只形成一个片段，说明该质粒上只有1个限制酶EcoRⅤ的识别位点．用限制酶MboⅠ单独切割该质粒时，形成两个片段，说明该质粒上有两个限制酶MboⅠ的识别位点．用限制酶EcoRⅤ和MboⅠ联合切割该质粒时，形成三个片段，其中有一个片段的长度与用MboⅠ单独切割该质粒时产生的片段长度相同（2.5kb），另外的两个片段是5.5kb和6kb，这说明限制酶EcoRⅤ的切割位点存在于用MboⅠ单独切割该质粒时产生的另一片段（11.5kb）上．质粒上EcoRV、MboI的切割位点如图所示：．

故答案为：

（2）①引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效

②引物Ⅰ′自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效

（3）DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上

（4）如图：

【点评】本题结合PCR过程示意图，考查PCR技术、DNA分子复制、基因工程等知识，要求考生识记PCR技术的过程及原理，能分析题图提取有效信息答题；掌握DNA分子半保留复制特点，能进行简单的计算；能根据题干信息判断限制酶在质粒上的位置．