（4）直接从静置的培养瓶中取培养原液计数，细胞分布不均，得到的数值会偏小；故正确做法是摇匀培养液后再取样和培养后期的样液稀释后再计数．

（5）不能用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板，因为血球计数板上的刻度较精细，故应该将血球计数板浸泡和冲洗．

故答案为：

（1）B A D

（2）培养液较多，与空气接触面积较小，故供氧较少

（3）葡萄糖浓度较低，故营养物供应较少

（4）摇匀培养液后再取样 培养后期的样液稀释后再计数

（5）浸泡和冲洗

【点评】本题考查了种群数量的影响因素、血球计数板的计算等相关知识，要求考生具有一定的分析能力，平时做题时要注重这方面能力的培养，血球计数板的计算是个难点，需引起重视．

32．（8分）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。

请根据以上图表回答下列问题。

（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是耐高温。

（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？引物对B。

（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？否。

（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为农杆菌。

（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，．假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。

①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到2种DNA片断。

②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到1种DNA片断。

【考点】Q2：基因工程的原理及技术

【分析】PCR技术是在体外对DNA进行扩增，所用的DNA聚合酶与体内DNA聚合酶不同，是耐高温的DNA聚合酶，过程为变性使DNA分子两条链鈖旋开来，复性是让引物与DNA解旋开来的单链互补配对，延伸是在DNA聚合酶的作用在引物引导下合成子代DNA分子。耐高温的DNA分子中通常含有G与C碱基比例大，因为它们之间形成三个氢键，而A与T之间只有两个氢键。

【解答】解：（1）PCR方法扩增目的基因的过程中，需要进行高温解链过程，因此使用的DNA聚合酶具有耐高温的特性。

（2）耐高温的DNA分子中通常含有G与C碱基比例大，因为它们之间形成三个氢键，因此稳定性强。引物B中含C与G的碱基对较多，可采用较高的退火温度。

（3）多种限制酶切割，形成不同的切割位点，所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列就没有专一性要求。

（4）植物基因工程中常用农杆菌做受体细胞。

（5）据图分析，用到了EcoR I酶和AlI酶切割抗原DNA片段产生了X、Y两个片段，而用EcoR I酶和SmaI酶切割质粒产生了 M、N两个片段，且M、N片段间存在Pst I酶切点。因此再用EcoRⅠ和PstⅠ酶切割这两片段形成的重组质粒，由于保留了Pstl的切割位点，所以可以得到两种DNA分子。而用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切重组质粒中，如图I﹣②过程只能产生一种DNA片断。

故答案为：

（1）耐高温

（2）引物对B

（3）否

（4）农杆菌

（5）①2 ②1

【点评】本题具有一定的难度，考查了运用PCR方法扩增目的基因的有关知识，意在考查考生的图解识别能力，尤其是限制酶的作用是解答本题的难点和关键点。

33．（6分）某同学进行实验，甲图为实验开始状态，乙图为实验结束状态．请在乙图所示实验结果的基础上继续实验，探究蔗糖的水解产物能否通过半透膜．

增添的实验材料：蔗糖酶溶液、斐林试剂、试管、滴管、水浴锅等．

（1）设计出继续实验的简要步骤：

①向a、b两管分别加入等量蔗糖酶溶液，水浴加热（或隔水加热）U型管至适宜温度，观察a、b两管内液面的变化；

②吸取a、b两管内适量液体，分别加入A、B两试管中，并加入斐林试剂，（60～65℃）水浴加热，观察A、B试管内有无砖红色沉淀．

（2）预测实验现象并作出结论．